全球非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）正成为一种高发的肝脏疾病，其对肝脏纤维化检测的需求也在不断增加。肝纤维化（HF）是肝脏损伤后常见的病理性修复反应，是慢性肝病向肝硬化转变的关键环节。HF的发病机制复杂，肝脏受损时，多种细胞会释放各种细胞因子，随后启动信号转导通路，激活肝星状细胞（HSCs），使其转化为肌成纤维细胞（MFBs）。这些MFBs可分泌大量的细胞外基质（ECM），影响肝脏的正常结构，进一步引发HF的发展。目前，HF相关的治疗靶点依然停留在动物实验阶段，尚未进入临床应用。

在众多细胞因子中，转化生长因子β（TGF-β）在细胞生长、分化及ECM重构等方面扮演着重要角色。TGF-β家族包括三种亚型（TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3），其中TGF-β1在各种组织中表现出较高的表达水平和生物活性，对纤维化疾病的进展有显著影响。TGF-β信号通路是促进HSC活化及ECM生成的主要通路。肝脏受到损伤时，TGF-β与其Ⅱ型受体结合，随即招募Ⅰ型受体，启动下游信号传导，最终导致HSCs的激活和胶原的合成。

在研究中，LX－2细胞作为一种广泛应用的HSCs体外细胞模型，由于保留了活化HSCs的关键特征，如细胞因子信号传导、基因表达、维甲酸代谢及纤维形成等，常用于肝炎及纤维化研究。LX－2细胞在含10% FBS和1%青-链霉素的高糖DMEM完全培养基中进行常规培养，细胞生长至80%-90%密度时传代。在实验进行前，采用1%血清DMEM处理24小时进行饥饿处理，然后分为正常组和模型组，模型组用10 ng/mL TGF-β1诱导细胞活化并培养24小时后进行评估。

TGF-β1诱导细胞纤维化的过程中，处理条件如血清饥饿、细胞密度、因子浓度及作用时间会影响模型的成功建立。因此，建议在实验初期尝试不同的细胞密度、诱导浓度及时间以获得最佳效果。一般文献中使用5-10 ng/mL的TGF-β1处理24-48小时，根据细胞的响应情况调整具体浓度和时间。

对于纤维化模型的评估方法，常见的包括检测纤维蛋白的合成与沉积、观察细胞形态变化，以及检测相关蛋白和基因的表达水平。例如，通过Transwell法和EdU检测模型组细胞的迁移与增殖能力。使用免疫荧光（IF）、西方杂交（WB）或PCR方法可以检测α-SMA和CollagenⅠ的表达水平，结果显示模型组中两种蛋白的表达均有所上升。此外，TGF-β1显著上调了Smad2和Smad3的磷酸化，并抑制了Smad7的表达。

在研究中，尊龙凯时的重组TGF-β1蛋白以其低内毒素、高纯度及高活性，在多种类型细胞培养中展现了良好的适用性。该产品不仅在肝脏纤维化研究中得到广泛应用，还可用于靶向TGF-β药物研发及功能评估等多个环节。同时，尊龙凯时提供的其他TGF-β相关产品也能够满足不同研究需求。